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兽医传染病学实验室技术综复习题

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2018年兽医传染病学实验室技术综复习题

一、试述平板凝集试验

平板凝集试验最好用平板凝集试验箱进行比较方便,也可用清洁玻璃板以蜡笔划成若干4平方厘米方格。试验前,将试验箱电灯打开,使玻板微温,血清与抗原的温度应提高到与室温近似。用0.2毫升吸管将血清以0.08,0.04,0.02及及0.01毫升的剂量,分别加于一排4个方格内,吸管须稍斜并接触玻板,然后以抗原滴管垂直于每格血清上滴加一滴平板抗原,此抗原一滴等于0.03毫升(如为自制滴管,须事先测定准确)。或用0.2毫升吸管每格加o.03毫升以牙签或细金属棒将血清抗原混合摊开,摊开时一根牙签只用于一份血清,以0.01,0.02,0.04及0.08血清量顺序摊开。拿起玻板轻轻摇动,使充分混合,加盖以防水分蒸发。5—8分钟后读记结果,,方法是:

100%抗原被凝集,出现大凝集片和小的粒状物,液体完全透明,记录符号为++++, 75%抗原被凝集,有明显凝集片和颗粒,液体几乎完全透明,记录符号为+++,50%抗原被凝集,有可见凝集块和颗粒,液体不甚透明,记录符号为++, 25%抗原被凝集,仅仅可以看见颗粒,液体混浊,记录符号为+,无凝集现象,记录符号为—。

平板凝集试验的血清量0.08、0.04、0.02和0.01毫升加入抗原后,其稀释倍数为1;25、 l:50、 l:100和1;200,判定标准为:

山羊、绵羊、猪血清凝集价1:50以上为阳性,1:25为可疑;大家畜和人1:1000以上为阳性,1:50为可疑。可疑反应家畜,再过半个月后重检。重检如仍为可疑,可依据畜群具体情况判定,即畜群中有其他阳性病畜则该可疑牲畜判为阳性,若畜群中无阳性病畜,则判为阴性。

二、试述药敏试验

1.纸片制备:

(1)用口径6毫米的打孔器打出滤纸小圆片,分盛于小瓶内,每瓶100片,用棉花塞好,共若干瓶,干热灭菌。

(2)取链霉素、土霉素、金霉素,四环素、氯霉素,呋喃唑酮等抗菌药,分别用灭菌蒸馏水配成1毫克/毫升浓度的溶液。青霉素等革兰氏阳性细菌的抗菌药对病原性大肠杆菌的抑制作用很弱,一般不在选用之列。

(3)吸取抗菌药的溶液注入纸片瓶内,每100片注入1毫升,使所有纸片浸透,1—2小时,标明抗菌药名称。

(4)37℃烘干,加塞,冰箱保存,备用。一般应在两个月内用完。

2.病原性大肠杆菌分离:

(1)在发病仔猪群中,选一,二头病情严重的仔猪,剖杀,用铂耳采小肠前段内容物和肠系膜淋巴结材料,划线接种于麦康盖琼脂平板上,培养24小时。

(2)用铂耳挑取大肠杆菌典型的红色菌落,移植于普通琼脂斜面上,

(3)通过生化试验和血清学试验,鉴定其为病原性大肠杆菌。

3.正式试验:

(1)做好琼脂平板。:将病原性大肠杆菌的菌液,均匀涂布接种于平板上。

(2)用无菌小镊子夹取抗菌药纸片,贴于琼脂平板上,并标明药名。视平板大小,贴上若干片不同药物的纸片,纸片间的距离,应有15毫米。

(3)37℃培养24小时。

(4)检查纸片外围的抑菌圈,并量其直径。

(5)无抑菌圈的纸片为无抗菌作用。抑菌圈直径小于10毫米的纸片为轻度抗菌,在10-15毫米之间的纸片为中度抗菌,大于15毫米的纸片为高度抗菌。

(6)治疗病猪应选高度抗菌的药物或中度抗菌的药物。

三、试述牛结合菌素皮内反应

注射部位:在颈侧中部上1/3处剪毛(三个月以内犊可在肩胛部)直径约10厘米,用卡尺测量术部中央皮皱厚度。

注射剂量,用结核菌素原液,三个月以内的小牛0.1毫升, 3个月至一岁牛0.15毫升,12个月以上的牛0.2毫升,必须注射于皮内。

观察反应:皮内注射后,应分别在72,120小时进行两次观察,注意局部有无热、痛、肿胀等炎性反应,并以卡尺测量术部肿胀面积及皮皱厚度。 ‘

在第七十二小时观察后,对呈阴性及可疑反应的牛只,须在甲注射部位,第二回注射。第二回注射后应于第四十八小时(即120小时)再观察一次。

判定;

(1)阳性反应:局部发热,有痛感,并呈现界限不明显的弥漫性水肿,质地如面团,肿胀面积在35×45毫米以上,或上述反应较轻,而皱皮厚度在原测量基础上增加8毫米以上者,为阳性反应,其记录符号为(+)。

(2)疑似反应:局部炎性水肿不明显,肿胀面积在35×45毫米以下者,皮厚增加在5-8毫米间,为疑似反应,其记录符号为(±)。

(3)阴性反应:局部无炎性水肿,或仅有无热坚实及界限明显的硬块,皮厚增加不超过5毫米者,为阴性反应,其记录符号为(-)。

四、试述猪瘟的诊断

(一)临床诊断和尸体剖检诊断

详细检查病猪的临床症状,作白细胞计数和白细胞分类计数,调查发病的原因、经过。猪群的发病情况,传染源、症状、治疗效果,病程和死亡情况等,写出病历。

病猪急宰或死亡后,应进行剖检,全面检查,特别应注意各器官组织尤其是淋巴结、肾脏的出血变化,写出剖检记录。

从临床症状、流行病学和病理变化等方面,进行分析,注意有无其他疾病(如猪丹毒、猪肺疫、猪副伤寒等)的可能性,作出初步诊断。

(二)细菌学检查

采取血液,淋巴结,脾脏等材料,接种于血液琼脂,麦康盖琼脂平板上,培养24—48小时,检查有无疑似的病原细菌。如有,须进一步鉴定和作动物接种试验。将检查结果记入病历内,提出诊断意见。

(三)家兔接种试验

1.选健壮、体重3斤以上、未做过猪瘟试验的家兔4头,分成2组,试验前3天测温,每天3次,间隔8小时。

2.采病猪淋巴结和脾脏作1;10悬液,取上清液加青霉素、链霉素各500单位处理后,给第一组肌注,每头5毫升。如用血液须加抗凝剂,每头接种2毫升,第二组不注射,作对照。

3.继续测温,每隔6小时一次,连续3天。

4.7天后,用猪瘟兔化弱毒,1:20-50的清液各1毫升静注,每隔6小时测温1次,,连续3天。第二组也同时作同样处理,供对照。

5.根据发生的体温反应,参照表33作出诊断。

(四)猪按种试验

1.选健康,易感,同窝断乳的仔猪5头,分4组,除第三组,2头,其余各组均为1头,分4组,除第三组2头,其余各组均为1头,分别隔离饲养。

2.用猪瘟兔化弱毒疫苗1:10稀释I毫升,接种第一组免疫,一周后作试验。

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